GB/T38481-2020微生物超低频突变测定 双重测序法

GB/T 38481-2020.Determination of ultralow-frequency mutations for microorganisms-Duplex sequencing.
1范围
GB/T 38481规定了用双重测序法测定微生物超低频突变的方法。
GB/T 38481适用于微生物基因组或基因片段超低频突变的测定。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
超低频突变 ultralow-frequency mutations
化学、物理或生物因素导致微生物DNA发生的频率低于1X 10-的永久性改变。
3.2
条形码标签 barcode label
接在待测DNA片段两侧的核苷酸片段,用以标示同一扩增家族的DNA.协助进行突变位点的确认。
3.3
互补标签家族 complementary tag family
所有含两端互补条形码标签的DNA片段。
3.4
双链同源序列 double-strand consensus sequences;DCSs
带有相同条形码标签的双链DNA序列,包含反向互补链。
4原理
在待测DNA片段两端接上一段12 nt随机且互补的双链核苷酸条形码标签,然后对所有带有条形码标签的序列进行双重的高通量测序。利用12 nt随机互补标签，排除掉测序文库制备过程中所引入的突变,进而准确检测突变位点和突变率。
5试剂
除非另有规定,仅使用分析纯试剂。
5.1 水。GB/T 6682,一级。
本标准规定了用双重测序法测定微生物超低频突变的方法。 本标准适用于微生物基因组或基因片段超低频突变的测定。